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1964年Yanofsky在研究Eoli色氨酸合成酶A蛋白时推测无义密码子的存在。

他的推测是从两个不同的角度：一是为trpA编码的mRNA还编码了trpB，trpC，trpD和trpE。

即一个mRNA分子中可以作为不同多肽的模板，那么有可能在翻译时中途在某个位点（两个肽的连接处〕停止，然后再从下一个新的起点翻译，这样使各个肽可以分开，而不至于产生一条很长的肽链。

这就意味着终止密码子的存在。

另一个角度是他发现EoliTrp-的突变株是不能合成完整的色氨酸合成酶蛋白，但继续对它进行诱变可以得到回复突变。

回复突变中有两种，一种是个别发生了变化，而另一种是完全回复，没有任何氨基酸组成的变化，这表明，EoliTrp-不可能是任何移码突变的结果，那么这类的突变很可能携带有阻止合成的无义密码子。

1962年Benzer和他的学生S.Champe对T4rⅡ突变的研究时发现野生型的T4rⅡ这段有两个顺反子rⅡA和rⅡB，共同转录一个多顺反子mRNA，但翻译成两个分开的蛋白A和B。

当发生缺失突变时，其中有一个突变型为rl589，证明是缺失所造成，缺失的区域含rⅡA基因右边的大部分，和rⅡB左边的小部分。

互补实验表明rl589的产物是一条多肽，但无蛋白A的活性，但有B蛋白的活性。

Benzer认为，这种缺失可能使mRNA失去了A蛋白合成“终止”

和“B”

蛋白合成“起始”

的密码子，因此翻译时沿着一条mRNA阅读下去，产生了一条长的肽链。

1964年Brenner及其同事获得了T4噬菌体编码头部蛋白基因的琥珀突变（amber），并进行了精细作图，并分离研究了各种突变型的多肽。

突变型的肽链比野生型的要短，因此可以推测琥珀突变可能产生终止密码子，使肽的合成在中途停止下来；由于突变位点越靠近基因的左端，所产生的肽链越短，越靠近右端越接近野生型，据此可以推测翻译的过程是从mRNA的5’端向3’阅读。

肽链的合成是从N端向C端延伸。

由于头部蛋白80%是由新合成的蛋白质组成。

因此他们将各种突变型及野生型T4噬菌体侵染Eoli后10分钟，把14C标记的氨基酸加到培养基中，过一段时间，从感染的Eoli中抽提蛋白，头部蛋白可以通过14C标记来加以鉴别。

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